РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСА НОДУЛЯРНОГО ДЕРМАТИТА КРС НА ОСНОВЕ МЕТОДА ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ

В настоящее время нодулярный дерматит (НД) является одним из наиболее вредоносных и экономически значимых заболеваний КРС во многих странах, в том числе и в Казахстане. В связи с неблагоприятной обстановкой в стране по данному виду заболевания требуется быстрая диагностика данного вируса для своевременного реагирования и принятия необходимых мер. Для решения этих задач разработана тест-система на основе метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР РВ). При разработке тест-системы применены современные молекулярно-биологические методы, с помощью которых определены наиболее консервативные и специфические участки GPCR гена вируса НД. С помощью выбранных участков сконструированы и синтезированы видоспецифичные пары праймеров и зондов. Для постановки ПЦР РВ оптимизирован температурный режим и соотношения компонентов реакционной смеси. Разработанная тест-система проверена по параметрам специфичности и чувствительности с применением ДНК вирусов НД, оспы овец, оспы коз, оспы верблюдов, и плазмид со вставками фрагментов гена вируса НД. Результаты лабораторных испытаний показали, что тест-система работает специфично, а чувствительность составляет 20 аттограмм плазмидной ДНК в одной реакции, что соответствует 5 копиям молекул ДНК вируса НД.

1. Мищенко А.В., Мищенко В.А., Шевкопляс В. Н., Джаилиди Г.А., Дресвянникова С.Г., Черных О.Ю., Кононов А.В. Акбаев Р.М. Экологические особенности нодулярного дерматита крупного рогатого скота // Ветеринария Кубани. – 2017. – №5. – С. 22.

2. Roberts H. Lumpy skin disease in Turkey (Europeanside) Preliminary outbreak assessment. – URL:https://www.gov.uk/government/uploads/system/uploads/ attachment_data/file/437163/ poa-lumpy-skin-turkey-201506.pdf (accessed date: 18.04.16).

3. Семакина В.П., Жильцова М.В., Саввин А.В., Акимова Т.П. Распространение заразного узелкового дерматита (Нодулярного дерматита) крупного рогатого скота в мире // Ветеринария сегодня. – 2017. – №3 (22). – С. 13.

4. Gunenkov V.V. Lumpy skin disease in cattle // Collection of scientific papers of VGNKI. – 2005. – Vol.66. – P. 46-54.

5. Коновалов М.Г., Шевченко А.А. Профилактика нодулярного дерматита в Краснодарском крае // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Перспективы производства продуктов питания нового поколения». – 2017. – С. 15

6. Енгашев C., Смирнов Д., Алиев М. Нодулярный дерматит крупного рогатого скота // Ветеринария. – 2017. – С. 26-27

7. Lubinga J.C., Tuppurainen E.S., Coetzer J.A., Stoltsz W.H., Venter E.H. Evidence of lumpy skin disease virus over-wintering by transstadial persistence in Amblyomma hebraeum and transovarial persistence in Rhipicephalus decoloratus ticks // Exp. Appl. Acarol. – 2014. – Р. 77–90. DOI: 10.1007/s10493-013-9721–7

8. Santhamani R., Yogisharadhya R., Venkatesean G., Shivachandra S.B., Randey A.B., Ramakrishnan M.A. Molecular characterization of Indian sheeppox and goatpox viruses based on RPO30 and GPCR genes // Virus genes. 2014. –Р. 286–91. DOI 10.1007/s11262-014-1095-3

9. Tulman E.R., Afonso C.L., Lu Z., Zsak L., Kutish G.F., Rock D.L. Genome of lumpy skin disease virus // J. Virol. 2001. – Р. 7122–30. DOI: 10.1128/JVI.75.15.7122-7130.2001.

10. Monier A., Claverie J.M., Ogata H. Horizontal gene transfer and nucleotide compositional anomaly

11. in large DNA viruses // BMC Genomics. – 2007. –Р. 1–17. DOI: 10.1186/1471-2164-8-456.

12. Amin A.A., Ehab El-Nahas, Abd-Elbaset El-Mashed. Pathological and Virological Studies on an Outbreak of Lumpy Skin Disease among Cattle in Kalubia Governorate-Egypt // Journal of Advanced Veterinary Research. – 2015. –Р. 165-75.

13. Kumar S., Stecher G., Tamura K. MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 7.0 for bigger datasets // Mol. Biol. Evol. – 2016. – Р. 1870–4. DOI: 10.1093/molbev/msw054.

14. Beard P.M. Lumpy skin disease: a direct threat to Europe // Vet. Ec. – 2016. – Vol. 28. –P. 557-558.

15. Пестова Я.Е., Артюхова Е.Е., Кострова Е.Е., Шумилова И.Н., Кононов А.В., Спрыгин А.В. Разработка ПЦР в режиме реального времени для выявления полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита в пробах от крупного рогатого скота // Сельскохозяйственная биология. – 2018. – Т. 53 (2). – С. 422-429.

16. Кодекс здоровья наземных животных МЭБ. Гл. 1.2. Критерии включения болезней, инфекций и инфестаций в список МЭБ // Париж, 2014. – Т. 1. – 23 изд. – С. 5.

17. Lumpy skin disease are not detected in the territory of the country // Ekho –broadsheet. – URL: http://www. echo.az/article.php (accessed date: 18.04.16).