ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ ПРАЙМЕРОВ И ЗОНДОВ ПРИ РАЗРАБОТКЕ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ РЕАЛ-ТАЙМ ПЦР ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГРИППА ПТИЦ И БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА.
Abstract
В настоящей работе представлены результаты оценки специфичности праймеров и зондов, разработанных для мультиплексной Real-time ПЦР тест-системы, предназначенной для диагностики гриппа птиц и болезни Ньюкасла. Для проверки специфичности использовали РНК вирусов болезни Ньюкасла, гриппа птиц А типа и инфекционного бронхита кур. В качестве положительных контролей применялись сконструированные плазмидные ДНК с фрагментами генов М (вирус болезни Ньюкасла) и NP (вирус гриппа птиц), отрицательным контролем служила деионизированная вода. Оптимизированная программа амплификации включала этап обратной транскрипции, денатурации и 45 циклов ПЦР в реальном времени с регистрацией флуоресцентных сигналов.
Полученные результаты показали, что разработанные праймеры и зонды обеспечивают избирательное определение целевых геномных фрагментов вирусов при отсутствии перекрёстных реакций и ложноположительных сигналов. Дополнительно проведено сравнение с коммерческими наборами ПЦР-ГРИПП-А-ФАКТОР и ПЦР-НЬЮКАСЛА-ФАКТОР, результаты которого подтвердили достоверность и воспроизводимость данных, полученных с использованием разработанной системы.
Таким образом, разработанная тест-система характеризуется высокой специфичностью и может быть рекомендована для применения в ветеринарной диагностике.
References
1. Kazakhstanskaya sel'skokhozyaystvennaya gazeta Agrariy Kazakhstana. Ptitsevodstvo Kazakhstana: sostoyanie i problemy razvitiya [Elektronnyy resurs]. – Rezhim dostupa: http://abkaz.kz/pticevodstvo-kazaxstana-sostoyanie-i-problemy-razvitiya/ (data obrashcheniya: 25.11.2020).
2. Bogoyavlenskiy A. P., Berezin V. E. Virusnye infektsii v promyshlennom ptitsevodstve i problemy ikh diagnostiki // Biotekhnologiya. – Sektsiya 2.
3. Usilenie podgotovlennosti i ukreplenie sposobnosti k otvetnym deystviyam v sluchaye vysokopatogennogo ptichego grippa (i drugikh zoonoznykh zabolevaniy, poyavlyayushchikhsya zanovo ili povtorno) v stranakh Vostochnoy Yevropy i Tsentral'noy Azii: materialy soveshchaniya, Stambul, 29 iyunya – 1 iyulya 2009 g. [Elektronnyy resurs]. – Rezhim dostupa: http://www.fao.org/docs/eims/upload/267122/ak698r00.pdf
4. Gorbunova A. S., Pysina T. V. Gripp zhivotnykh. – M., 1973.
5. Syurin V. N., Osidze N. G. Gripp ptits // Maloizvestnye zaraznye bolezni zhivotnykh. – M., 1973.
6. Adlhoch C., Gossner C., Koch G., Brown I., Bouwstra R., Verdonck F. et al. Comparing introduction to Europe of highly pathogenic avian influenza viruses A(H5N8) in 2014 and A(H5N1) in 2005 // Euro Surveill. – 2014. – Vol. 19, № 50. – P. 20996.
7. Control of Communicable Diseases Manual. – 20th Edition. – Washington DC: APHA Press, 2015. – ISBN 978-0-87553-018-5.
8. Li Q. et al. Epidemiology of Human Infections with Avian Influenza A(H7N9) Virus in China // New England Journal of Medicine. – 2014. – Vol. 370. – P. 520–532.
9. Fotina T. I. The role of the microbial monitoring in the prevention of poultry // Proceedings of XXV World Poultry Congress. – China, 2016. – P. 250–251.
10. Jhung M. A., Nelson D. I., Centers for Disease C., Prevention. Outbreaks of avian influenza A (H5N2), (H5N8), and (H5N1) among birds – United States, December 2014 – January 2015 // MMWR Morb Mortal Wkly Rep. – 2015. – Vol. 64, № 4. – P. 111.
11. World Organisation for Animal Health (OIE). Update on highly pathogenic avian influenza in animals (type H5 and H7), 2015–2016 [Elektronnyy resurs]. – Rezhim dostupa: http://www.oie.int/animal-health-in-the-world/update-on-avian-influenza/2015/
12. Geraci J. R., St. Aubin D. J., Barker I. K., Webster R. G., Hinshaw V. S., Bean W. J. et al. Mass mortality of harbor seals: pneumonia associated with influenza A virus // Science. – 1982. – Vol. 215. – P. 1129–1131.
13. CDC. Seasonal Influenza (Flu) [Elektronnyy resurs]. – Rezhim dostupa: http://www.cdc.gov/flu/
14. Lin Y. P., Shaw M., Gregory V., Cameron K., Lim W., Klimov A. et al. Avian-to-human transmission of H9N2 subtype influenza A viruses: Relationship between H9N2 and H5N1 human isolates // PNAS. – 2000. – Vol. 97, № 17. – P. 9654–9658.
15. Ito T., Gorman O. T., Kawaoka Y., Bean W. J., Webster R. G. Evolutionary analysis of the influenza A virus M gene with comparison of the M1 and M2 proteins // Journal of Virology. – 1991. – Vol. 65, № 10. – P. 5491–5498.
Review
For citations:
. Biosafety and Biotechnology. 2025;(24).
JATS XML
Email this article 