ОЦЕНКА МЕТОДОВ ДЕТЕКЦИИ МИКОПЛАЗМЕННОЙ КОНТАМИНАЦИИ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОМИКОПЛАЗМЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

В данной статье представлены результаты исследования по обнаружению микоплазменной инфекции в различных клеточных линиях и оценке эффективности противомикоплазменных препаратов. Для обнаружения микоплазм в культурах клеток использовали методы окрашивания ДНК флюорохромами (DAPI, Apollo Scientific) наборы PlasmoTest™ (Invivogen, France), MycoStrip (Invivogen, France) и EZ-PCR™ (Biological Industries, Israel) рекомендуемые при выявлении микоплазм в культуре клеток. На основании полученных результатов исследований, было установлено, что, противомикоплазменные препараты MycoZap (Lonza Bioscience), Plasmocin (Invivogen, France), MRA (BIO-RAD) и ВМ-Cyclin (Roche) эффективны в борьбе с микоплазменной контаминацией культур клеток. Метод детекции микоплазм ДНК-флюорохромами определение наличия микоплазмы может быть субъективным, так как его чувствительность к микоплазмам низкая. В свою очередь набор MycoStrip может давать ложноотрицательный результат ввиду наличия микоплазм не входящих в список обнаруживаемых видов этого набора. Положительные и отрицательные результаты PlasmoTest™ точно коррелировали с результатами EZ-PCR™. При подозрении на наличие микоплазменной контаминации для предварительного анализа можно использовать метод окрашивания ДНК и набор MycoStrip, а для окончательного подтверждения PlasmoTest™ и EZ-PCR.

1. Degeling MH, Maguire CA, Bovenberg MS, Tannous BA. Sensitive assay for mycoplasma detection in mammalian cell culture. Anal Chem. 2012; 84(9):4227–4232. doi: 10.1021/ac2033112. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

2. Dvorakova H, Valicek L, Reichelova M. Detection of mycoplasma contamination in cell cultures and bovine sera. J Vet Med. 2005;50(6):262–268. doi: 10.17221/5622-VETMED. [CrossRef] [Google Scholar]

3. Dobrovolny PL, Bess D. Optimized PCR-based detection of mycoplasma. J Vis Exp. 2011(52). [PMC free article] [PubMed]

4. Uphoff CC, Drexler HG. Comparative PCR analysis for detection of mycoplasma infections in continuous cell lines. In Vitro Cell Dev Biol. 2002; 38(2):79–85. doi: 10.1290/1071-2690(2002)038<0079:CPAFDO>2.0.CO;2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

5. Uphoff CC, Drexler HG. Detecting mycoplasma contamination in cell cultures by polymerase chain reaction. Methods Mol Med. 2004; 88:319–326. [PubMed] [Google Scholar]

6. Drexler HG, Uphoff CC. Contamination of cell cultures Mycoplasma. The Encyclopedia of Cell Technology. New York: Wiley; 2000. – P. 609-27

7. Freshney RI. Culture of Animal Cells. 6th edition. Hoboken, NJ, USA: John Wiley & Sons; 2010. [Google Scholar]

8. Uphoff CC, Drexler HG. Mycoplasma contamination of cell cultures. In: Flickinger MC, editor. Encyclopedia of Industrial Biotechnology: Bioprocess, Bioseparation, and Cell Technology. New York, NY, USA: John Wiley & Sons; 2010. pp. 3611–3630. [Google Scholar]

9. Drexler HG, Uphoff CC. Mycoplasma contamination of cell cultures: incidence, sources, effects, detection, elimination, prevention. Cytotechnology. 2002; 39(2):75–90. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

10. СОП-GMP-НИИПББ-ПР-265-2020. ПЦР анализ по входному контролю культуры клеток на наличие микоплазмы с помощью набора EZ-PCR™ Mycoplasma Detection Kit.

11. Исмагамбетова Д.Ж., Наханов А.К., Жаппарова Г.А. Оценка влияния фармазина на элиминацию микоплазм в культурах клеток // Инновационные развитие науки в обеспечении биологической безопасности. – Гвардейский, 2014. – 109 с.

12. Ligasová, A., Vydržalová, M., Buriánová, R., Brůčková, L., Večeřová, R., Janošťáková, A., & Koberna, K. (2019). A New Sensitive Method for the Detection of Mycoplasmas Using Fluorescence Microscopy. Cells, 8(12), 1510. https://doi.org/10.3390/cells8121510

13. Young, L., Sung, J., Stacey, G. et al. Detection of Mycoplasma in cell cultures. Nat Protoc 5, 929–934 (2010). https://doi.org/10.1038/nprot.2010.43

14. https://www.invivogen.com/sites/default/files/pictures/japanese-cell%20bank-study-mycoplasma-detection-methods.pdf

15. RMSTRONG, S.E., MARIANO, J.A. and LUNDIN, D.J., 2010. The scope of mycoplasma contamination within the biopharmaceutical industry. Biologicals, vol. 38, no. 2, pp. 211-213. http://dx.doi.org/10.1016/j.biologicals.2010.03.002.