ОПТИМИЗАЦИЯ КОМПОНЕНТНОГО СОСТАВА РЕАКЦИОННОЙ СМЕСИ ПЦР ДЛЯ НАРАБОТКИ МИКОБАКТЕРИАЛЬНЫХ ГЕНОВ

Туберкулез крупного рогатого скота – инфекционное респираторное заболевание крупного рогатого скота без особых клинических признаков, вызванное бактерией Mycobacterium bovis (M. bovis), которая может преодолевать межвидовой барьер, заражать и вызывать заболевания у многих других диких и домашних животных. Иммунизация крупного рогатого скота путем вакцинации является стандарттной профилактической мерой при борьбе с туберкулезом. Единственной доступной в настоящее время вакциной против туберкулеза человека и крупного рогатого скота является живая аттенуированная бацилла Кальметта-Герена (БЦЖ) и ее модифицированные варианты. Необходимость разработки отечественной вакцины, обеспечивающую более высокую и устойчивую защиту, чем вакцина БЦЖ, является актуальной. И целью данной работы является выбор оптимального компонентного состава реакционной смеси ПЦР для наработки протективных белков M. bovis Esat-6 и TB10.4. В результате работ по оптимизации постановки ПЦР для наработки микобатериальных генов M. bovis использовали в составе реакционной смеси Taq ДНК полимеразу, содержащую MgCl2 – 0,3 мкл; 10х ПЦР-буфер – 2,5 мкл; специфические праймеры (20 пМ) по 1 мкл каждой, смесь dNTP (10 мМ) – 1 мкл; целевая ДНК – 5 мкл в общем объеме 25 мкл при оптимизированном режиме: 94°C – 5 мин, 94°C – 1 мин, 55/62°C – 40 сек, 72°C – 1,30 мин (35 циклов), и 72°C – 7 мин, 4°C – охлаждение и хранение бесконечно

1. Pollock J.M., Neill S.D. Mycobacterium bovis infection and tuberculosis in cattle // Vet J. – 2002. – Р. 115-127.

2. Abbate J.M., Arfuso F., Iaria C., Arestia G., Lanteri G. Prevalence of Bovine Tuberculosis in Slaughtered Cattle in Sicily, Southern Italy // Animals (Basel). – 2020. – 1473 p.

3. Muller B., Durr S., Alonso S., Hattendorf J., Laisse C.J., Parsons S.D., van Helden P.D., Zinsstag J. Zoonotic Mycobacterium bovis-induced tuberculosis in humans // Emerg. Infect. Dis. – 2013. – Р. 899-908.

4. Hewinson R.G., Vordermeier H.M., Smith N.H., Gordon S.V. Recent advances in our knowledge of Mycobacterium bovis: a feeling for the organism // Vet Microbiol. – 2006. – Р. 127–139.

5. Domingo M., Vidal E., Marco A. Pathology of bovine tuberculosis // Res Vet Sci. – 2014. – Р. 20-29.

6. Абитаев Р.Т., Шораева К.А., Нурпейсова А.С., Сырым Н.С., Абай Ж.С., Джекебеков К.К., Сармыкова М.К., Еспембетов Б.А., Касенов М.М. Подбор и синтез праймеров для наработки генов, кодирующих протективные белки M. Bovis // Евразийское Научное Объединение. Ветеринарные науки. – 2021. – С. 159-164.