РАЗРАБОТКА МЕТОДА ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ S. ЕNTERIСА

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) стала широко используемым инструментом обнаружения, идентификации и дифференциации патогенных микроорганизмов при диагностике заболеваний человека и животных. Частые вспышки сальмонеллы, связанные с продуктами питания, требуют необходимости разработки методов быстрого обнаружения для контроля распространения заболезния. ПЦР в режиме реального времени (ПЦР РВ) позволяет обнаружить наличие ДНК патогенов. Обнаружение сальмонеллы в ПЦР РВ проводилось с использованием разработанных праймеров SInv-1F, SInv-1R и зонда SE-Probe. Положительные результаты были получены при тестировании на специфичность ПЦР РВ тест системы для обнаружения S. enterica при использовании в качестве матриц ДНК бактерии S. Enteritidis, S. Typhimurium и S. Virchow. Разработанная ПЦР РВ тест система для обнаружения ДНК S. enterica протестирована на ДНК гетерологичных микроорганизмов родов Pasterella, Clostridium, Escherichia coli, Bacillus, Staphylococcus, Pseudomonas, Klebsiella, Mycoplasma, Candida и Aspergillu. Гетерологичные микроорганизмы показали отрицательный результат при тестировании разработанной ПЦР РВ. ПЦР РВ тест система позволяет выявлять ДНК S. enterica в пределах 1-10 микробных клеток. Разработанная ПЦР РВ тест система позволила определить 99 (9,7 %) изолятов S. enterica в результате исследования 1020 биологических образцов (883 образцов из пищевых продуктов и 137 образцов клинического материала), собранных в 2018-2019 гг. Диагностическая эффективность тест-системы «ПЦР РВ S. enterica» составила 100 %.

1. Hendriksen RS, Vieira AR, Karlsmose S, Lo Fo Wong DM, Jensen AB, Wegener HC. Global monitoring of Salmonella serovar distribution from the World Health Organization Global Foodborne Infections Network Country Data Bank: results of quality assured laboratories from 2001 to 2007// Foodborne Pathog Dis. 2011;8: - P. 887–900.

2. Scallan E, Hoekstra RM, Angulo FJ, Tauxe RV, Widdowson MA, Roy SL. Foodborne illness acquired in the United States: major pathogens // Emerg Infect Dis. 2011;17: -P. 7–15.

3. Majowicz SE, Musto J, Scallan E, Angulo FJ, Kirk M, O’Brien SJ. The global burden of nontyphoidal Salmonella gastroenteritis // Clin Infect Dis. 2010;50: -P. 882–889.

4. European Food Safety Authority. European Centre for Disease Prevention and Control The European Union One Health 2018 Zoonoses Report // 5926EFSA J. 2019; -P. 17

5. Judd MC, Hoekstra RM, Mahon BE, Fields PI, Wong KK. Epidemiologic patterns of human Salmonella serotype diversity in the USA // 1996-2016. Epidemiol Infect. 2019; -P. 147-187.

6. Majowicz SE, Musto J, Scallan E, Angulo FJ, Kirk M, O’Brien SJ. The global burden of nontyphoidal Salmonella gastroenteritis // Clin. Infect. Dis. 2010; 50: -P. 882–889. 10.1086/650733

7. EFSA-European Food Safety Authority. The European Union Summary Report on Trends and Sources of Zoonoses, Zoonotic Agents and Food-borne Outbreaks in 2011 // EFSA Journal. 2013; 11: -P. 250

8. Hohmann EL. Nontyphoidal Salmonellosis // Clin. Infect. Dis. 2001; 32: - P. 263–269.

9. Okeke IN, Laxminarayan R, Bhutta ZA, Duse AG, Jenkins P, O'Brien TF. Antimicrobial resistance in developing countries // Part I: recent trends and current status. Lancet Infect. Dis. 2005; 5: - P. 481–493.

10. Hoorfar J. Rapid detection, characterization, and enumeration of foodborne pathogens // APMIS Suppl. 2011 Nov;(133): -P. 1-24. doi: 10.1111/j.1600-0463.2011.02767.x. PMID: 22250747.

11. Hammack T. S., Valentin-Bon I. E., Jacobson A. P., Andrews W. H. Relative effectiveness of the Bacteriological Analytical Manual method for the recovery of Salmonella from whole cantaloupes and cantaloupe rinses with selected preenrichment media and rapid methods // J. Food. Prot. – 2004. 67: -P. 870–877.

12. Ye J., Coulouris G., Zaretskaya I., Cutcutache I., Rozen S., Madden T. L. Primer-BLAST: a tool to design target-specific primers for polymerase chain reaction // BMC bioinformatics. ‒ 2012. ‒ T. 13. ‒ C. 1-11.

13. Яцыщина С.Б. Выявление и типирование возбудителей сальмонеллеза молекулярно-генетическими методами // Автореферат канд. диссертации, - 16.00.03, - 2003 г.