СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ОБЩЕГО БЕЛКА SARS-COV-2 ВИРУСА COVID-19

Одним из главных требований к создаваемым новым вакцинам является их безопасность в применении, в том числе содержание общего белка, являющиеся одним из основных показателей качества и безопасности вакцин. В данной статье представлены результаты работ по сравнительному анализу методов определения общего белка в составе активной фармацевтической субстанции (АФС) и также балк-продукта вакцины «QazCovidin ®.Определение концентрация общего белка проводились с помощью сравнения методов Лоури, Бредфорда, коммерческих наборов Клини Тест-БЛ и BSA Gold Protein. В результате определения общего белка в составе АФС классическим методом Лоури и коммерческим набором КлиниТест-БЛ были получены наивысшие показатели в среднем 616,67 и 589 мкл/мл, а в балк-продукте 51,11 и 47,38 мкл/мл, соответственно. Самый минимальный показатель содержания общего белка 38,39±0,000059 показывает метод с использованием коммерческого набора BSA Gold Protein. Средние значения содержания общего белка показали результаты, полученные методом Брэдфорда и определение общего белка коммерческим набором Клини Тест-БЛ. Полученные данные позволяют рекомендовать использование набора Клини Тест-БЛ для использования в контроле качества, так как данный набор отличается легкостью и быстротой метода определения, которая не уступает классическому методу Лоури. При определении содержания общего белка в балк-продукте, используемого для приготовления вакцины QazVac против COVID-19 метод классической Лоури показал наилучший результат с высокой степенью чувствительности.

1. Gorbalenya, A.E. et al. The species severe acute respiratory syndrome-related coronavirus: classifying 2019-nCoV and naming it SARS-CoV-2 // Nat. Microbiol. – 2020;5(4):536–544.

2. Bosch, B.J. et al. The coronavirus spike protein is a class I virus fusion protein: structural and functional characterization of the fusion core complex // J. Virol. – 2003;77(16):8801–8811. 3. Watanabe, Y. et al. Site-specific glycan analysis of the SARS-CoV-2 spike // Science. – 2020;369(6501):330–333.

3. Nieto-Torres, J.L. et al. Subcellular location and topology of severe acute respiratory syndrome coronavirus envelope protein // Virology. – 2011;415(2):69–82.

4. Liao, Y. et al. Biochemical and functional characterization of the membrane association and membrane permeabilizing activity of the severe acute respiratory syndrome coronavirus envelope protein // Virology. – 2006;349(2):264–275.

5. Tseng, Y.T. et al. SARS-CoV envelope protein palmitoylation or nucleocapid association is not required for promoting virus-like particle production // J. Biomed. Sci. – 2014;21(34):21–34.

6. Schoeman, D. Coronavirus envelope protein: current knowledge // Virol. J. – 2019;16(1):69.

7. Hung, A.Y., Sheng M. PDZ domains: structural modules for protein complex assembly // J. Biol. Chem. – 2002;277(8):5699–5702.

8. Javier, R.T., Rice, A.P. Emerging theme: cellular PDZ proteins as common targets of pathogenic viruses // J. Virol. – 2011;85(22):11544–11556.

9. Ariel, L.A., Blake, J.L., Brenda, G.H. A conserved domain in the coronavirus membrane protein tail is important for virus assembly // J. Virol. – 2010;84(21):1418–11428.

10. Chang, C.K. et al. Modular organization of SARS coronavirus nucleocapsid protein // J. Biomed. Sci. – 2006;13(1):59–72.

11. Kumar, A. et al. Characterization of nucleocapsid (N) protein from novel coronavirus SARS-CoV-2 // Biochem. Biophys. Res. Commun. – 2020;527(3):618–623.

12. Macnaughton, M. et al. Ribonucleo protein-like structures from coronavirus particles // J. Gen. Virol. – 1978;39(3):545–549.

13. Kuo, L., Koetzner, C.A., Masters, P.S., A key role for the carboxy-terminal tail of the murine coronavirus nucleocapsid protein in coordination of genome packaging // Virology. – 2016;494:100–107.

14. Grunewald, M.E. et al. The coronavirus nucleocapsid protein is ADP-ribosylated // Virology. – 2018;517:62–68.

15. Chen, Y. et al. The phosphorylation of the N protein could affect PRRSV virulence in vivo // Vet. Microbiol. – 2019;231:226–231.

16. Perutz, M.F., Rossmann, M.G., Cullis, A.F., Muirhead, H., Will, G., North, A.C. Structure of haemoglobin: a three-dimensional Fourier synthesis at 5.5-A. resolution, obtained by X-ray analysis (англ.) // Nature. – 1960;185(4711):416-422. PMID 18990801.

17. Белки // Химическая энциклопедия. – Москва: Советская энциклопедия. – 1988. Архивная копия от 3 февраля 2012 на Wayback Machine.

18. Якубке X., Ешкайте X. Аминокислоты, пептиды, белки. // М. Мир. – 1985.

19. Фармакопея США, Национальный формуляр (USP 37, NF 32). 1057 Статья, полученная из биотехнологии: анализ общего белка.

20. Европейская фармакопея 8.0, 2.5.33: Общий белок.

21. Lowry, O.H., Rosenbrough, N.J., Farr ,A.Z., Randall, R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. – 1951;193:265-275.

22. Браун Р., Джарвис К., Хайленд К. Измерение белка с использованием бицинхониновой кислоты: устранение мешающих веществ. Анальная биохимия. 1989;180:136-9 опубликовано

23. Redinbaugh M, Turley R. Адаптация анализа белка бицинхониновой кислоты для использования с микротитровальными планшетами и фракциями градиента сахарозы. Анальная биохимия. 1986;153:267-71 опубликовано

24. Noble, J.E., Bailey, M.J.A. Quantitation of proteins // Methods in enzymology. 2009;463:73-95.

25. Malim, T., Ridzuan, P.D. Principle in Biochemistry. http://www.slideshare.net/UmiBiee, 2010.

26. Anggun M. Determining the concentration of protein on egg albumin through Lowry method. http://www.scribd.com, 2013.

27. Бенсадун А., Вайнштейн Д. Анализ белков в присутствии мешающих материалов // Anal Biochem, 70 (1976), – С. 241-250.

28. Batav1 C., Gothalwal R., Tembhre M. Еfficacy of the established methods for determination of protein in fish visceral extract. 462024, India.

29. Полачек И., Кабиб Э. Простая методика определения белка по методу Лоури в разбавленных растворах и в присутствии мешающих веществ // Anal Biochem, 117 (1982). – С. 311-314.

30. Родригес-Вико Ф., Мартинес-Кайуэла М., Гарсиа-Перегрин Э., Рамирес Х. Методика устранения помех в методе Лоури для определения белка // Anal Biochem, 183 (1989), – С. 275- 278.

31. Танялчин Т., Кутай Ф.З., Аслан Д. / Исследование интерференции следует проводить для каждого используемого метода измерения белка // Accredit Qual Assur, 6 (2001), – С. 427-430.

32. Кусуноки Х., Окума К., Хамагути И. / Оценка влияния лактозы на вакцины и предложение методологической корректировки определения общего белка по методу Лоури // Jpn J Infect Dis, 65 (2012), – С. 489-494.