АПРОБАЦИЯ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ И ИДЕНТИФИКАЦИИ Aspergillus flavus МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»

в статье представлены результаты исследований по апробации тест-системы для индикации и идентификации микроскопических грибов Aspergillus flavus методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени». Применяя программное обеспечение Multiple Sequence Alignment Viewer 1.22.1 и UGENA 44.0. Тест-система для A. flavus включает специфические праймеры: прямой праймер (f) 5’-3’ GGGCCCGCAGCAAGAATAC, обратный праймер (r) 3’-5’ ACGAGTTGTCACCTTCCCGAGA; флуоресцентный краситель: HEX, зонд - CGGTTCGCTTTGGTCATCGT, гаситель BHQ2. Протокол постановки реакции: предварительная денатурация – 950C - 5 минут (1 цикл); денатурация - 950C - 5 сек, отжиг - 600C - 15 сек (50 циклов). Зонд: AGCATAGGCTGATGCTCGTAGGC, флуоресцентный краситель – ROX, гаситель - BHQ-2. Чувствительность тест-системы составляет 1000 клеток. Установлена оптимальная концентрация праймеров равная 9 pМ каждого праймера на реакцию. Оптимальная концентрация зонда - 0,4 pM. Полученные результаты свидетельствуют о том, что применение дихотомических ключей не позволяет максимально точно дифференцировать фитопатогенные грибы A. flavus. Новый подход к идентификации изолятов подтвердил принадлежность 15 выделенных штаммов к виду A. flavus из 20 выделенных из проб кукурузы с признаками, проявляющимися, как загнивание корней и увядание, и первично типированных как Aspergillus на основании изучения культурально-морфлогических свойств. Исследование выполнено согласно тематическому плану-заданию Министерства сельского хозяйства Российской Федерации, регистрационный номер ЕГИСУ НИОКТР 122030200367-8.

1. Amaike S., Keller N. P. Aspergillus flavus // Annual review of phytopathology. – 2011. – Vol. 49. – No. 1. – P. 107-133.

2. Gourama H., Bullerman L. B. Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus: Aflatoxigenic fungi of concern in foods and feeds: A review // Journal of Food protection. – 1995. – Vol. 58. – No. 12. – P. 1395-1404.

3. Rudramurthy S. M. et al. Invasive aspergillosis by Aspergillus flavus: epidemiology, diagnosis, antifungal resistance, and management // Journal of Fungi. – 2019. – Vol. 5. – No. 3. – P. 55.

4. Cho H. J. et al. Regulation of Conidiogenesis in Aspergillus flavus // Cells. – 2022. – Vol. 11. – No. 18. – P. 2796.

5. Билай В.И., Коваль Э.З. Аспергиллы. – Киев: Наукова думка, 1988. – 204 с.

6. Билай В.И. Основы общей микологии. – Киев, Вища школа, 1980. – 360 с.

7. Рябинин И.А. Разработка ключа для видовой идентификации Aspergillus spp. – возбудителей заболеваний человека, циркулирующих в Северо-Западном округе России / И.А. Рябинин, С.С. Расулова // «Профилактическая медицина-2017»: сборник научных трудов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. 6–7 декабря 2017 года. Ч. 2. – СПб.: Изд-во СЗГМУ им. И.И. Мечникова, 2017. – 312 с.

8. Klich M.A. Identification of common Aspergillus species. – Utrech: Centraalbureeau voor Schimmelculture, 2002. – 116 p.

9. Стахеев А.А. Молекулярно-генетические методы в исследовании таксономии и специфической идентификации токсинпродуцирующих грибов рода Fusarium: успехи и проблемы / А.А. Стахеев, Л.В. Самохвалова, Д.Ю. Рязанцев, С.К. Завриев // Сельскохозяйственная биология. – 2016. – Т. 51. – №3. – С. 275-284.

10. Игнатьева С.М. Апробация мультиплексной тест-системы «HRM-Zygo-Asp» на клиническом материале больных мукормикозами / С.М. Игнатьева, В.А. Спиридонова, Т.С. Богомолова, Ю.Л. Авдеенко, Ю.В. Борзова, С.Н. Хостелиди, О.В. Шадривова, М.О. Попова, Ю.А. Чудиновских, И.С. Зюзгин, О.С. Успенская, Н.В. Васильева // Проблемы медицинской микологии. – 2019. – Т. 21. – №4. – С. 36-42.