biobБиобезопасность и БиотехнологияBiosafety and Biotechnology2707-72412957-5702Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасностиbiob-10Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯMICROBIOLOGYОПТИМИЗАЦИЯ КОМПОНЕНТНОГО СОСТАВА РЕАКЦИОННОЙ СМЕСИ ПЦР ДЛЯ НАРАБОТКИ МИКОБАКТЕРИАЛЬНЫХ ГЕНОВOPTIMIZATION OF THE PCR REACTION MIXTURE COMPONENT COMPOSITION FOR THE OBTAINING OF MYCOBACTERIAL GENESАбайЖ. С.abaizh097@mail.ruНурпейсоваА. С.АбитаевР. Т.АбитаевР. Т.ТоккаринаГ. Б.ШораеваК. А.ДжекебековК. К.КасеновМ. М.ЗакарьяК. Д.РГП «Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности»Казахстан202103112022084954Copyright © Абай Ж.С., Нурпейсова А.С., Абитаев Р.Т., Абитаев Р.Т., Токкарина Г.Б., Шораева К.А., Джекебеков К.К., Касенов М.М., Закарья К.Д., 20222022Абай Ж.С., Нурпейсова А.С., Абитаев Р.Т., Абитаев Р.Т., Токкарина Г.Б., Шораева К.А., Джекебеков К.К., Касенов М.М., Закарья К.Д.Абай Ж.С., Нурпейсова А.С., Абитаев Р.Т., Абитаев Р.Т., Токкарина Г.Б., Шораева К.А., Джекебеков К.К., Касенов М.М., Закарья К.Д.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.biosafety.kz/jour/article/view/10

Туберкулез крупного рогатого скота – инфекционное респираторное заболевание крупного рогатого скота без особых клинических признаков, вызванное бактерией Mycobacterium bovis (M. bovis), которая может преодолевать межвидовой барьер, заражать и вызывать заболевания у многих других диких и домашних животных. Иммунизация крупного рогатого скота путем вакцинации является стандарттной профилактической мерой при борьбе с туберкулезом. Единственной доступной в настоящее время вакциной против туберкулеза человека и крупного рогатого скота является живая аттенуированная бацилла Кальметта-Герена (БЦЖ) и ее модифицированные варианты. Необходимость разработки отечественной вакцины, обеспечивающую более высокую и устойчивую защиту, чем вакцина БЦЖ, является актуальной. И целью данной работы является выбор оптимального компонентного состава реакционной смеси ПЦР для наработки протективных белков M. bovis Esat-6 и TB10.4. В результате работ по оптимизации постановки ПЦР для наработки микобатериальных генов M. bovis использовали в составе реакционной смеси Taq ДНК полимеразу, содержащую MgCl2 – 0,3 мкл; 10х ПЦР-буфер – 2,5 мкл; специфические праймеры (20 пМ) по 1 мкл каждой, смесь dNTP (10 мМ) – 1 мкл; целевая ДНК – 5 мкл в общем объеме 25 мкл при оптимизированном режиме: 94°C – 5 мин, 94°C – 1 мин, 55/62°C – 40 сек, 72°C – 1,30 мин (35 циклов), и 72°C – 7 мин, 4°C – охлаждение и хранение бесконечно

Bovine tuberculosis is an infectious respiratory disease of cattle without specific clinical signs, caused by the bacterium Mycobacterium bovis (M. bovis), which can cross the species barrier, infect and cause disease in many other wild and domestic animals. Immunization of cattle by vaccination is a standard preventive measure in the fight against tuberculosis. The only currently available vaccine against human and bovine tuberculosis is live attenuated Bacillus Calmette-Guérin (BCG) and its modified variants. The need to develop a domestic vaccine that provides higher and more stable protection than the BCG vaccine is relevant. And the purpose of this work is to select the optimal component composition of the PCR reaction mixture for the production of protective proteins M. bovis Esat-6 and TB10.4. As a result of work to optimize the PCR setting for the obtaining mycobacterial genes of M. bovis, Taq DNA polymerase containing MgCl2 – 0.3 μl; 10x PCR buffer – 2.5 µl; specific primers (20 pM) – 1 µl each, dNTP mixture (10 mM)-1 µl; target DNA – 5 µl were used as part of the reaction mixture in a total volume of 25 µl with optimized mode: 94°C – 5 min, 94°C – 1 min, 55/62°C – 40 sec, 72°C – 1.30 min (35 cycles), and 72°C – 7 min, 4°C – cooling and storage indefinitely

туберкулез крупного рогатого скотавакцинаM.bovisполимеразная цепная реакцияbovine tuberculosisvaccineM. bovispolymerase chain reactionReferencesPollock J.M., Neill S.D. Mycobacterium bovis infection and tuberculosis in cattle // Vet J. – 2002. – Р. 115-127.Pollock J.M., Neill S.D. Mycobacterium bovis infection and tuberculosis in cattle // Vet J. – 2002. – Р. 115-127.Abbate J.M., Arfuso F., Iaria C., Arestia G., Lanteri G. Prevalence of Bovine Tuberculosis in Slaughtered Cattle in Sicily, Southern Italy // Animals (Basel). – 2020. – 1473 p.Abbate J.M., Arfuso F., Iaria C., Arestia G., Lanteri G. Prevalence of Bovine Tuberculosis in Slaughtered Cattle in Sicily, Southern Italy // Animals (Basel). – 2020. – 1473 p.Muller B., Durr S., Alonso S., Hattendorf J., Laisse C.J., Parsons S.D., van Helden P.D., Zinsstag J. Zoonotic Mycobacterium bovis-induced tuberculosis in humans // Emerg. Infect. Dis. – 2013. – Р. 899-908.Muller B., Durr S., Alonso S., Hattendorf J., Laisse C.J., Parsons S.D., van Helden P.D., Zinsstag J. Zoonotic Mycobacterium bovis-induced tuberculosis in humans // Emerg. Infect. Dis. – 2013. – Р. 899-908.Hewinson R.G., Vordermeier H.M., Smith N.H., Gordon S.V. Recent advances in our knowledge of Mycobacterium bovis: a feeling for the organism // Vet Microbiol. – 2006. – Р. 127–139.Hewinson R.G., Vordermeier H.M., Smith N.H., Gordon S.V. Recent advances in our knowledge of Mycobacterium bovis: a feeling for the organism // Vet Microbiol. – 2006. – Р. 127–139.Domingo M., Vidal E., Marco A. Pathology of bovine tuberculosis // Res Vet Sci. – 2014. – Р. 20-29.Domingo M., Vidal E., Marco A. Pathology of bovine tuberculosis // Res Vet Sci. – 2014. – Р. 20-29.Абитаев Р.Т., Шораева К.А., Нурпейсова А.С., Сырым Н.С., Абай Ж.С., Джекебеков К.К., Сармыкова М.К., Еспембетов Б.А., Касенов М.М. Подбор и синтез праймеров для наработки генов, кодирующих протективные белки M. Bovis // Евразийское Научное Объединение. Ветеринарные науки. – 2021. – С. 159-164.Абитаев Р.Т., Шораева К.А., Нурпейсова А.С., Сырым Н.С., Абай Ж.С., Джекебеков К.К., Сармыкова М.К., Еспембетов Б.А., Касенов М.М. Подбор и синтез праймеров для наработки генов, кодирующих протективные белки M. Bovis // Евразийское Научное Объединение. Ветеринарные науки. – 2021. – С. 159-164.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.